Menu Zoeken English

Handvat voor studie naar DNA reparatie

In deze sequentie-analyse is te zien dat het stukje DNA dat codeert voor de Avi-tag succesvol is gekloneerd tussen de coderende sequenties voor de TEV site en dCas. Plaatje is gemaakt met SnapGene software.

Vraagstelling

Onze cellen worden voortdurend blootgesteld aan mutaties. Deze kunnen leiden tot ernstige ziektes zoals kanker. Gelukkig worden de meeste mutaties meteen gerepareerd door o.a. mismatch repair enzymen. Om deze enzymen te kunnen bestuderen wordt een speciaal eiwit (dCas9, Cas9 is ook bekend van de CRISPR/Cas9 techniek) uit bacteriën gebruikt als een soort road block. De isolatie van dCas9 zou kunnen worden verbeterd door het te koppelen aan een peptide dat een AVI-tag heet. Het eiwit dCas9 met die Avi-tag kan in bacteriën worden geproduceerd en gekoppeld aan biotine. Deze biotinegroep wordt dan weer gebruikt als handvat om dCas9 te zuiveren en te gebruiken in de experimenten.

Aanpak

Met behulp van de zogenaamde fusie-PCR techniek is een stuk DNA gemaakt dat gekloneerd kon worden in een plasmide waarin de code voor dCas9 aanwezig is. Dit verkregen DNA construct is overgebracht naar een bacteriestam die het nieuwe eiwit kon maken en de biotinegroep kon koppelen.

Resultaat

Er zijn succesvol twee varianten gekloneerd. Uit grote bacteriekweken is vervolgens het met biotine gelabelde eiwit gezuiverd en aan de opdrachtgever afgeleverd.

Opleiding(en)

  • Biologie en Medisch Laboratoriumonderzoek voltijd

Type

Project

Aan dit project werkten mee

  • Randall de Waard
  • Ilse Wolters
  • Paul Reusink
  • Damiën Vitters
  • Wendy Gian
  • Kerwin Steevenz
  • Moise Stok
  • Katinka Ligthart
  • Marcio Marques Pinto
  • Martine Kruf
  • Chris van der Laan

Begeleiders

  • Jos Veldscholte
  • Esther Appeldoorn

We gebruiken cookies voor analyse en marketing om de website te verbeteren.

Wijzig cookie-instellingen